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im电竞官网平台·多光子显微镜成像技术之二十四:基于梯度折射率多模光
发布时间:2024-03-23 02:15:58 来源:im电竞官网 作者:IM电竞官网注册

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  在PBS处分为照明光束和参考光束。照明光束部分放置了空间光调制器(SLM),并将调制平面成像到光纤的输入端。光纤另一端利用透镜对将光纤的输出成像到CMOS的探测阵列上。调节不同波前输入并记录输出,计算出传输矩阵(TM),就可以在远端用SLM控制输出光斑。剩余的光路部分用于研究聚焦后光束的性质,检验是否胜任FLA手术脉冲传输。脉宽通过双光子干涉自相关仪来测量,光路中放置翻折镜,用来切换操作区域的明场成像。双光子荧光信号收集利用双色镜同步进行,通过透镜聚焦到PMT,成像结果用于引导手术操作。

  系统中远端的聚焦则基于测量传输矩阵,但是当脉冲能量超过临界值时,会产生非线性效应,使得通过传输矩阵实现的光束扫描质量下降。为减少非线性积累,作者在后续成像中选用了长度为10cm、芯径为400um的GRIN光纤,焦点尺寸为2.3 μm,视场大于200 μm。

  此外,全系统无透镜聚焦、无机械扫描,探头尺寸在200 ~ 400 μm。随后作者对小鼠耳蜗样本进行了FLA与TPF的成像实验。图2为染色后的小鼠耳蜗毛细胞的双光子成像结果,b为黄框部分放大图,c为选择性消融掉了一个细胞后的对比图,消融可以发生在7×7um2的区域,而不影响相邻细胞的荧光信号。

  ,一部分用来泵浦OPO,产生661-668nm的泵浦光,另一部分作为斯托克斯光。经由延时装置和双色镜使两束光时空重合,后经一组消色差透镜扩束进入SLM。波前控制的光路与前一系统一致,但增加了D形镜及偏振控制单元来完全控制输入光的偏振,对传输矩阵求解更完备,可提高激发光的利用率。

  光路中利用LED和相机获得明场成像以便定位样品。样品产生的CARS信号既可以前向收集,也可以背向收集。所用GRIN光纤的芯径为50um,包层为125um,NA为0.29,长度控制在30-35mm。在泵浦波长和斯托克斯波长下,纤芯中心附近形成的光斑的半高宽分别为1.23和1.55 um。


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